avangard-pressa.ru

Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов. - Медицина

Тема 5.2. Обмен и функции витаминов В5, В6, В7, В9, В12, С.

Качественные реакции на ниацин (витамин РР, никотиновая кислота, никотинамид)

Принцип метода. Биологическая функция ниацина заключается в том, что никотинамид служит активной частью коферментов НАД+ или НАДФ+, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях. РР-авитаминоз выражается в виде дерматита на симметричных участках тела, расстройствах деятельности желудочно-кишечного тракта, нервной системы.

Ход определения. 1. Качественная реакция ниацина с медью. Щепотку порошка (5-10 мг) витамина РР растворяют при нагревании в 10-20 каплях 10%-ного раствора уксусной кислоты. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5%0ного раствора ацетата меди. Жидкость становится мутной, при стоянии выпадает осадок синего цвета.

2. Качественная реакция обнаружения аминогруппы. Небольшое количество порошка витамина РР помещают в пробирку, прибавляют 2 мл 0,1 моль/л раствора гидроксида натрия и нагревают. Ощущают запах аммиака, который образуется при расщеплении амидной связи в молекуле ниацина.

К методическим рекомендациям

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.

Тема 5.3. Химическая природа, биосинтез, секреция и

Катаболизм гормонов.

Качественные реакции, подтверждающие белковую природу инсулина

Ход определения. 1. Биуретовая реакция. К 1 мл раствора инсулина добавляют 5-6 капель раствора гидроксида натрия и 1-2 капли раствора сульфата меди (2), перемешивают. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.

2. Реакция Миллона. К 5-10 каплям раствора инсулина добавляют 2-3 капли реактива Милона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета.

3. Реакция Фоля. К 5-10 каплям раствора инсулина (использовать неразбавленный препарат) добавляют 2-3 мл раствора NaOH и кипятят 10 мин на маленьком пламени горелки. После охлаждения добавляют 1-2 капли раствора Pb(ONa)2 - появляется бурое окрашивание.

Примечание. Раствор Pb(ONa)2 приготовить в отдельной пробирке. Для этого к одной капле раствора ацетата свинца добавляют по каплям 10%-ного гидроксида натрия до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца.

При стоянии или нагревании бурое окрашивание может усилиться до черного и может выпасть черный осадок.

Качественные реакции на адреналин

Ход определения. 1.Реакция с хлоридом железа (3). В пробирку вносят 3 капли раствора адреналина и 1 каплю 1%-ного раствора хлорида железа (3). Появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое затем при добавлении 1 капли раствора гидроксида натрия приобретает вишнево-красный цвет. Реакция обусловлена тем, что пирокатехиновое ядро образует с ионами железа (3) соединения типа фенолятов.

2. Диазореакция на адреналин. В пробирку вносят 2-3 капли раствора адреналина, 2 капли раствора KIO3 и 2 капли раствора уксусной кислоты. Перемешивают и слегка нагревают. Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Окраска обусловлена тем, что при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель.

К методическим рекомендациям

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.

Тема 5.4. Механизм действия гормонов. Гормональная регуляция

Обмена углеводов и липидов.

٭Количественное определение малонового диальдегида

Свободными радикалами (R*) называют атомы, молекулы или структурные фрагменты молекул, имеющие на внешних орбиталях неспаренные электроны. В силу исключительно высокой реакционной способности радикалы могут взаимодействовать с различными молекулами, вызывая их повреждение. Малоновый диальдегид (МДА)― конечный продукт свободно-радикального окисленияполиненасыщенных высших жирных кислот, входящих в состав фосфолипидов биологических мембран. МДА - химически очень активное вещество: его альдегидные группы взаимодействуют с NH2-группами белков, вызывая необратимую денатурацию последних.

Активация в клетке пероксидных и свободно-радикальных процессов ― это один из факторов патогенеза атеросклероза, ишемической болезни сердца, инфаркта, инсульта, язвенной и ожоговой болезни, онкологических, воспалительных и инфекционных заболеваний, синдрома адаптационного перенапряжения и хронической усталости, диабета. Синдром пероксидации проявляется так же при низком уровне антиоксидантов, стрессе любого происхождения, действии синтетических лекарств и ксенобиотиков, гиподинамии, старении организма, избыточном потреблении в пищу жиров и углеводов, гипоксических состояниях, воздействия вибрации, электромагнитных полей, радиоактивного и ультрафиолетового излучений.

Цель работы. Определить содержание МДА в сыворотке крови.

Принцип метода. МДА реагирует с тиобарбитуратовой кислотой, при этом образуется окрашенное соединение – триметиловый комплекс. Оптическую плотность окрашенного раствора определяют на ФЭК при 532 нм и рассчитывают концентрацию МДА, исходя из молярного коэффициента экстинции триметилового комплекса.

Ход определения. Студентам выдается готовый лизат, приготовленный следующим образом: к 2 мл крови добавляют 0,2 мл 0,1%-ного раствора Тритон Х-100 и оставляют на 30 мин при 0°С. МДА определяют в образовавшемся лизате по нижеприведенной схеме:

№ Реактивы и этапы Пробы Опыт Контроль Лизат, мл 0,5 ― Физиологический раствор, мл 1,5 Трихлоруксусная кислота (30%-ный раствор), мл Инкубируют 15 мин при 0°С Центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин Надосадочную жидкость аккуратно сливают в помеченные стеклянные пробирки, отбирают из них точно по 2 мл надосадочной жидкости и добавляют: Тиобарбитуратовая кислота (0,5%-ный раствор), мл Кипятят 15 мин (осторожно!) Охлаждают до 15-25°С Фотометрируют против воды (λ=532 нм, толщина кюветы 1 см). D532 Dоп―Dк

Расчеты

Концентрацию МДА (Сх) вычисляют по формуле:

Cx=76,92•(Dоп―Dк) (мкмоль/л)

Примечание. Величина 76,92 рассчитывается исходя из молярного коэффициента экстинкции триметилового комплекса (1,56·105 М-1см-1) и разведения.

К методическим рекомендациям